TECNICA DE HIBRIDACIÓN O SECUENCIACIÓN EN DIABETES II

En esta técnica se busca la unión complementaria de ácidos nucléicos (ADN o ARN). Las técnicas de hibridación se utilizan para detectar una molécula diana partiendo de una sonda complementaria a ella. 

Se usan en el diagnóstico de enfermedades, la identificación de microorganismos patógenos, el estudio de perfiles de expresión génica, la localización de genes en cromosomas o en la comparación de especies hibridando su ADN. 

Analisis de articulo cientifico utilizando una tecnica de hibridacion

•  Tema: Introducción a la biología molecular y aplicación a la pediatría (6): Caso clínico: Trastorno molecular en la diabetes insípida central. Análisis de un gen polimórfico: Tipaje HLA 
• Objetivo: identificar el trastorno genético molecular de la diabetes insipida 
• Material Biológico: Muestra de sangre periférica 
• Gen: DQB 
• Amplificación: Mediante PCR se amplián 3 segmentos 
• Enzima de restricción: BSP120I 
• Visualización:Electroforesis

Inicia un proceso de hibridación con oligonucleotidos alelo específicos mediante la técnica de dot blot sobre una membrana de nylon para hibridarlas con sondas marcadas, sondas ASO, para que el ADN se hibride solo si existen esas regiones.

Posteriormente se realiza una secuenciación automatizada de cada exón amplificado   utilizando primers, se encontró 3 secciones de exones con 345,337 y 3327, estos fueron sometidos a secuenciación directa.


Articulo:  http://www.aeped.es/sites/default/files/anales/47-2-19.pdf

Referencias: 

http://medmol.es/glosario/53/ 
http://www.seap.es/c/document_library/get_file?uuid=dd48aeb8-9e38-4541-bcfb-d75fd6b2ee9f 
http://www.conganat.org/seap/revista/v30-n3/13.pdf

ARTICULO ANALIZADO DE PCR EN DIABETES II

Asociacion del SNP19 del gen <calpaína 10> a diabetes mellitus tipo 2 y factores de riesgo en la poblacion peruana

En la diabetes tipo II, que se define como una enfermedad originada por el medio ambiente y los genes. 
Asi el gen clapaína 10, constituye un gen de la suceptibilidad de esta enfermedad. En este artículo, se postula que los SNP 19,43 y 63 del gen CAPN 10, se asocian al desarrollo de esta enfermedad, ademas de los factores de riesgo como la obesidad, el indice de masa corporal la hiperglicemia, y la alta presion arterial ademas de la hipercolesterolemia.

Apartir de una muestra de ADN, se realizó la amplificaion de los SNP 19(intron6), 43(intrón 3) y 63(intron13) del gen CAPN10.

La tecnica de PCR utilizada para cada uno de los segmentos del gen CAPN 10, permitio la practica de su respectivo buffer de lisis 

conclusiones: como resultado se obtuvo que tanto en los pacientes diabéticos como en los no diabéticos el SNP19 se encuentra en equilibrio H-W. Despues se tomo en cuenta la frecuencia alélica, solo del SNP19 y se observó que el SNP19 del gen CAPN10 está asociado a DM2.

Referencias: 

http://www.sediabetes.org/gestor/upload/revistaAvances/avances%2026_3%20web.pdf#page=50

http://www.revistadeosteoporosisymetabolismomineral.com/pdf/articulos/12012040100070014.pdf

ARTICULO DE PCR PARA DIABETES MELLITUS II

Estudio genetico (OPG, RANKL, Runx2 y Receptores AGE) en cultivos osteblastos de pacientes con diabetes tipo II y fractura de cadera. Utilizando PCR real-time
Influencia de los nieveles de Glucosa y AGEs

La Diabetes Mellitus tipo II, se asocia con riesgo de fractura osteoporótica. se han señalado los posibles causantes, entre ellos, los fatores de la remodelacion ósea, qu estan incluidaos en las variaciones de glucosa, o por la presencia de poductos finales de la flicocilación no oxidativa (ADGs).

En el presente trabajo se busca valorar las variaciones de los genes, que generan alteraciones de la expresion relacionados con la diferenciacion y la actividad osteoblástica ( OPG, RANKL, Runx2 y AGER). Para ello, se analizaron cultivos primarios de hOB a partir de hueso trabecular. El estudio genético se realizó mediante PCR real - time

Conclusion: La presencia de un ambiente hiperglicémico y AGEs altera la expresión génica de RANKL, ratio RANKL/OPG y Runx2 en cultivos de osteoblastos procedentes de pacientes diabéticos con fractura de cadera.

Estas variaciones podrían generar alteraciones en el remodelado óseo que podría explicar, al menos en parte, la menor resistencia ósea y el aumento de incidencia de fracturas no traumáticas en estos pacientes.

                                                              video de PRC real-time


 Referencias: 

http://www.revistadeosteoporosisymetabolismomineral.com/pdf/articulos/12012040100070014.pdf

 http://www.scielo.org.ar/pdf/raem/v49n2/v49n2a03.pdf

 http://www.almageriatria.info/pdf_files/salamanca/alumnos_3/Alteraciones%20del%20hueso%20em%20la%20diabetes.pdf

EPIGÉNETICA Y DIABETES II

Etapas del desarrollo donde se pueden presentar alteraciones Epigenéticas

La Epigenetica es una forma de regulación génica en células especializadas que NO implica cambios en la secuencia del ADN y que son transmitidos a través de mitosis o meiosis. 

Los cambios epigenéticos se generan por metilación de histonas y genes. Se ha demostrado que el control epigenético de la expresion de un gen, está mediado por cambios estructurales en la cromatina, a través de mecanismos de unión específicas, la familiade unión al ADN metilado (MDB, methyl-CpG-binding domain), dentro de las cuales destacan la MeCp2, la MBD2 y la MBD3. 

Estas proteínas se unen al ADN y pueden inducir la represión génica a través de la metilación de residuos de lisina 9 en la histona H3

La metilación consiste en la adición post-síntesis de un grupo metilo en la posición 5’ del anillo de la citosina. Con esto se forma desoximetilcitosina en presencia de un sustrato que dona el grupo metilo y la enzima que lleva a cabo llamadas ADN metiltransferasas, y comprenden las metiltransferasas de novo(Dnmt3a y Dnmt3b, Dnmt3L), que metilan ADN que no estaba metilado; y las metiltransferasas de mantenimiento (Dnmt1, Dnmt1o, nmt1p), que conservan la metilación a través de las divisiones. 

La disminución en el aporte de donadores de grupos metilo durante el embarazo, como folatos, metionina y colina (junto con el complejo B), se ha asociado a una disminución de la metilación del ADN en el recién nacido.

 

  

Referencias: 

http://www.medigraphic.com/pdfs/imss/im-2014/ims141o.pdf 

http://catarina.udlap.mx/u_dl_a/tales/documentos/lcf/hernandez_r_sc/capitulo4.pdf 

 http://dialnet.unirioja.es/servlet/articulo?codigo=3019020